FRAP / FLIP
Was ist FRAP?
FRAP (Fluorescence Recovery after Photobleaching) ist die Regeneration von Fluoreszenz in einem definierten Bereich einer Probe nach einem Bleichprozess. Der FRAP-Effekt resultiert aus der Wanderung ungebleichter Fluorochrome aus der Umgebung in den gebleichten Bereich. FRAP dient zur Messung der Dynamik von Molekülbewegungen in zwei oder drei Dimensionen, z. B. bei Diffusions-, Transport- oder anderen Ortsveränderungen fluoreszenzmarkierter Moleküle in Membranen oder lebenden Zellen.
Was ist FLIP?
FLIP (Fluorescence Loss in Photobleaching) ist die Abschwächung oder das Verschwinden der Fluoreszenz in einem definierten Bereich, der an einen mehrfach ausgebleichten Bereich grenzt Ebenso wie FRAP wird auch FLIP dazu verwendet, die Mobilität von Proteinen in Membranen oder lebenden Zellen zu messen.
So wird ein FRAP-Experiment durchgeführt
- Definition der zu bleichenden Region in einer Zelle
- Kurze Beleuchtung der Region mit sehr hoher Laserintensität
- Aufzeichnung des Verlaufs der Fluoreszenzregeneration im ausgebleichten Bereich mit hoher zeitlicher Auflösung
- Änderungen der Intensität in der gebleichten Region repräsentieren die Summe aller Bewegungen der fluoreszierenden Moleküle, sowohl passive (z. B. Diffusion) als auch aktive (z. B. Transport).
- Die Regenerationszeit (Halbwertszeit) ist ein Maß für die Geschwindigkeit der Proteinbewegung.
So wird ein FLIP-Experiment durchgeführt
- Definition der zu bleichenden Region in einer Zelle
- Kurze Beleuchtung der Region mit sehr hoher Laserintensität
- Aufzeichnung des Verlaufs des Fluoreszenzverfalls im ungebleichten Bereich mit hoher zeitlicher Auflösung, idealerweise gleichzeitig mit der Bleichung
- Änderungen der Intensität in der ungebleichten Region repräsentieren die Summe aller Bewegungen der fluoreszierenden Moleküle, sowohl passive (z. B. Diffusion) als auch aktive (z. B. Transport).
- Die Halbwertszeit des Fluoreszenzverfalls ist ein Maß für die Geschwindigkeit der Proteinbewegung.